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透析袋的使用
发布时间:2010-05-17 阅读:907人

    透析技术自Thomas Graham 于1861年发明到现在已有一百多年的历史,它已成为生物化学实验室最简便,最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,去除盐、少量有机溶剂、小分子杂质、样品浓缩和改变微量样品的缓冲系统等都要用到透析技术。
    生物样品的透析只需使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子等物质不断扩散透析到袋外,直到袋内、外两边的浓度达到平衡。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的溶质浓度梯度形成的。透析的速度同欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度、膜的面积和温度成正比,与膜的厚度成反比。升高温度可加快透析速度。为最大限度地保持生物大分子的活性,通常采用4℃透析。
    透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜。目前较常用的是美国Union Carbide (联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,其截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)通常从700到数万不等。
    商品化的透析袋可制成管状,其扁平宽度为6~50 mm不等。为防干裂,出厂前一般都经10%的甘油处理,透析袋中含有微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。新购进的透析袋必须经过处理才能使用。50%的乙醇煮沸1小时,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤,再用蒸馏水冲洗后即可使用。实验证明,50%乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于蒸馏水中,置4℃保存。若长时间不用,可加入适量的叠氮钠(NaN2),以抑制微生物的生长。干的透析袋弯折时易出现裂口,用时必须仔细检查。
    经过处理的透析袋,使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满蒸馏水,用手指稍加压,检查是否漏液,确证无误后,再用蒸馏水洗净,方可装入待透析样品。装入样品时通常要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,因透析样品中的小分子浓度较大,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加是正常的,有时甚至可达50%以上。透析可以使用烧杯、量筒和塑料桶等容器,容器的大小以20-50:1为宜。少量样品溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
    通常为了把握透析效果,有时需要对透析液中欲去除的小分子残留物进行分析,如甘氨酸、二甲基甲酰胺、甲醛、戊二醛、碳酸根、偶联剂等。小分子残留物的检测分析方法很多,如 (NH4)2SO4可用1%的BaCl2检查,NaCl、KCl等可用1%的AgNO3 检查。有些检测方法比较复杂,或需要一定的条件,如确有必要可参考相关文献资料。
    为了加快透析速度,提高透析效率,除及时更换透析液外,还可使用磁力搅拌,还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司(Biomed Instruments Inc.)生产的各种型号的Zeineh 透析器,由于使用对流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。
 
附:透析袋的处理
 1. 根据需要,把透析管剪截成适当长度(10—20cm)。
 2. 在大体积的2%(w/v)碳酸氢纳和1mmol/L EDTA(pH8.0)中将透析管煮沸10分钟。
 3. 用蒸馏水彻底清洗。
 4. 于EDTA(1mmol/L,pH8.0)中煮沸10分钟,
 5. 或将透析管置盛有蒸馏水的烧杯内,高压蒸汽灭菌10分钟。
 6. 冷却后,存放于4℃。透析管必须确保始终浸于溶液中。
 7. 从此时起取用透析管时总须戴手套。
 8. 用前将透析管用蒸馏水清洗干净后即可使用。

 

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