T淋巴细胞和B淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性有丝分裂原，如植物血凝素(PHA)、刀豆球蛋白A（ConA）或细菌脂多糖（LPS)刺激后，可出现代谢旺盛、蛋白质和核酸合成增加、细胞体积增大并能进行有丝分裂的淋巴母细胞，此现象称为淋巴细胞转化 (Lymphocyte Transformation)。淋巴细胞转化率的高低，在一定程度上可以反映机体的细胞和体液免疫功能的水平。因此，淋巴细胞转化试验常作为测定机体免疫功能的指标之一。
转化的淋巴细胞包括淋巴母细胞和过渡型淋巴细胞，未转化的淋巴细胞指的是成熟的小淋巴细胞。在正常情况下，PHA诱导的淋巴细胞转化率为60～80%，如为50～60%则偏低，50%以下则为降低。
    淋巴细胞转化试验的方法有形态学方法、³H-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法及MTT比色法三种。
1、形态学方法(Morphological Method)
T淋巴细胞在体外培养过程中，受有丝分裂原如植物血凝素(PHA，ConA)等刺激后，可转化为体积较大的母细胞，胞浆增多而深染，核增大并可见核仁，部分细胞可出现有丝分裂，计数转化细胞的百分率可反映机体的细胞免疫功能。
2、同位素掺入法(Isotope  Incorporation Method)
T淋巴细胞受PHA或特异性抗原刺激后，发生有丝分裂，细胞进入S期，此时在细胞培养液中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷(³H-Thymidine Riboside，³H-TdR)或¹²⁵I标记的尿嘧啶核苷（¹²⁵I-Uridine Riboside，¹²⁵I-UdR），可被细胞摄入而掺入DNA中。细胞转化水平越高，掺入的放射性同位素越多。于培养结束厚收集细胞，用液体闪烁计数仪测定样本细胞中的放射性活性。实验中可根据所测定细胞同位素的掺入量，判定细胞的增殖水平。
3、噻唑兰比色法(MTT Colorimetry)
噻唑兰化学名为3-（4,5二甲基-2-噻唑）-2,5二苯基溴化四唑［3-(4,5-Dimethyl-2-Thiazolyl)-2,5-
Diphenyltetrazoliumbromide，MTT］是一种黄色可溶性小分子盐，细胞活化增殖时线粒体中的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为紫褐色的甲臜(fomazan)颗粒，沉积于细胞内或细胞周围，甲臜的生成量与细胞的活化增殖水平及细胞数量呈正比。甲臜经溶解后呈紫蓝色，颜色的深浅变化可用酶标仪测定并用OD值表示细胞活化与增殖的情况。MTT法虽然灵敏度低于放射性同位素掺入法，但操作简单迅速，成本低，无放射性污染。随着甲臜溶解液的改进，操作更加简便，而线性和重复性也非常好，更有利于药物高通量筛选，已有逐渐替代同位素掺入法的趋势。

附：实验方法
一、形态学方法(Morphological Method)【主要试剂与器材】
   1．RPMI 1640完全培养液（含10%小牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、30.0g/L谷氨酰胺，pH至7.2～7.4）。
   2．PHA（1mg/ml，溶于RPMI 1640培养液）。
   3．红细胞裂解液。
   4．瑞氏染液染色或吉姆萨染液，瑞氏-吉姆萨染液染色。
   5．离心机、恒温箱、计数器及显微镜等。
【操作方法】 
   1．取无菌抗凝血0.lml，加入1.8ml细胞培养液中，同时加入1 000μg/m1 PHA 0.1m1，对照管不加PHA，将细胞置37℃、5%CO₂培养3d，每天摇动1次。
   2．培养结束时吸弃大部分上清液，加入红细胞裂解液3-5ml混匀，置冰水浴3-5min。
   3．2000r/min离心10min，弃上清液，留0.2ml细胞沉淀制片，迅速吹干。
   4．吉姆萨染液染色 10～20min，水洗，干燥。
   5．油镜下观察推片的头、体、尾三部分，已转化的淋巴母细胞易集中于尾部和边缘部。计数200个淋巴细胞中转化的细胞数，计算转化率。
【结果判断】
   1．淋巴母细胞的形态学标准  细胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性及核的构造与核仁的有无。
   (1)成熟的小淋巴细胞：与未经培养的小淋巴细胞大小一样，为6～8μm，核染色致密，无核仁，核与胞浆比例大，胞浆染色为轻度嗜碱性。
   (2)过渡型淋巴细胞：比小淋巴细胞大，约10～20μm，核染色致密，但出现核仁，此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点。
   (3)淋巴母细胞：细胞体积增大，约20～30μm，形态不整齐，常有小突出，核变大，核质染色疏松，有核仁1～2个，胞浆变宽，常出现胞浆空泡。
   (4)其它细胞：如中性粒细胞在培养72h后，绝大部分衰变或死亡呈碎片。
   2．淋巴细胞转化率的计算
淋巴细胞转化率计算：按上述分类检查推片头、体、尾三部分，计数200个淋巴细胞，算出百分率。转化的淋巴细胞包括淋巴母细胞和过渡型淋巴细胞，未转化的淋巴细胞指的是成熟的小淋巴细胞。在正常情况下，PHA淋巴细胞转化率为60～80％，如为50～60％则偏低，50％以下则为降低。
【注意事项】
   1．培养基成分对转化率影响较大，注意其有效期。
   2．小牛血清用前需灭活。
   3．培养时要保证有足够的气体，一般10ml培养瓶内液体总量不要超过2ml。
   4．PHA剂量过大对细胞有毒性，太小不足以刺激淋巴细胞转化，试验前应先测定PHA转化反应剂量。
   5．实验中要严格无菌操作，防止污染。
二、³H-TdR掺入法(³H-TdR Incorporation Method)【主要试剂与器材】
  1．RPMI 1640培养液和PHA等  同“形态学方法”。
  2．³H-TdR工作液  取³H-TdR原液(lmCi/ml)用无菌生理盐水稀释40倍即成³H-TdR 工作液(25μCi/ml)，应用时每孔加20μl。
  3．闪烁液  2,5-二苯基恶唑(PPO)5.0g、1,4-双-(5-苯基恶唑基-2)苯(POPOP)0.5g溶于1000ml二甲苯中。
  4．49型玻璃纤维滤纸、多头细胞收集器、闪烁杯、β-液体闪烁计数器。
  5．二氧化碳细胞培养箱，96孔细胞培养板等。
【操作方法】
  1.无菌取淋巴细胞，用RPMI 1640培养液调细胞浓度至1×10⁶/ml。
  2.取上述细胞悬液加入96孔细胞培养板内，每孔100μl。每个样品加6-12孔，其中6孔为试验组，每孔加入PHA（10μg/ml）100μl，6孔为对照组，每孔加RPMI 1640培养液100μl。
  3.置37℃、5%CO₂孵育40～48h，每孔加³H-TdR 20μl，继续培养6h。
  4.多头细胞收集器将每孔培养物分别收集于直径24mm的圆形玻璃纤维纸上，抽气过滤并用蒸馏水充分洗涤。
  5.将滤纸片放50℃烘干约lh后，分别将每片滤纸浸于闪烁液中，每杯3～5ml。
  6.在β-液体闪烁计数器上测定每个样品的每分钟脉冲数(cpm)值。
【结果判断】
以刺激指数(SI)判断淋巴细胞转化程度
【注意事项】
  1．³H-TdR加入的时间  细胞分裂周期中只有S期合成DNA，故应在S期加入³H-TdR，加入过早不但不被细胞摄取，反而被降解为胸腺嘧啶，不能作为合成DNA的原料。一般在培养终止前6或16h加入³H-TdR，其掺入量高。
  2．³H-TdR法影响因素较多，需准确加样，精细操作，严格控制实验条件。
  3．闪烁液一般可重复使用3～5次，重复使用前先测本底，若大于250cpm则不能再用。
  4．平行样品的孔间误差应≤20%，否则实验数据不可信。
三、MTT比色法(MTT Colorimetry)【主要试剂与器材】  
  1．细胞培养液、Hank,s液、PHA等  同“形态学方法”。
  2．MTT溶液（5mg/ml经0.22μm滤膜过滤除菌），4ºC避光保存。
  3．甲臜溶解液。
  4．酶联免疫检测仪、96孔细胞培养板等。
【操作方法】
  1．用密度梯度离心法（淋巴细胞分离液）分离外周血单个核细胞并用Hank‘s液洗涤2次，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养液悬浮细胞，调细胞浓度至2×10⁶/ml。
  2．取上述细胞悬液加入96孔培养板中，每孔加 100μl，每个样品三个复孔，并设相应对照孔，对照孔加不含PHA的 1640培养液100μl，试验孔每孔加含 PHA(10μg/ml)的培养液100μl，混匀后置37℃、5%CO₂孵育68h。
  3．每孔弃上清液100μl，加MTT溶液 10μl/孔，混匀后继续培养4h，培养结束时，每孔加100μl甲臜溶解液，充分溶解，置酶联免疫检测仪分别在波长 570nm和 630nm下测定A值。
【结果判断】
以刺激指数(SI)判断淋巴细胞转化程度：
【注意事项】
  1．加入甲臜溶解液后要溶解3-6h再进行测定，若来不及测定，可将未加甲臜溶解液的培养板置4℃保存，测定前取出，置室温数分钟后再加，然后依上法测定。
  2．实验过程注意无菌操作。
【应用与评价】
淋巴细胞转化试验被广泛用于测定细胞增殖活性、细胞生长因子及某些细胞毒反应。
淋巴细胞转化试验的形态学方法、³H-TdR掺入法及MTT比色法各有特点。形态学方法操作简单，能在显微镜下观察到淋巴细胞在不同时期转化的形态特征，但统计淋巴细胞转化率有差异。³H-TdR掺入法，比形态学方法更为客观、准确、重复性好。MTT比色法的最大优点是测定迅速，可用酶联免疫检测仪同时多孔测定；结果准确，与³H-TdR掺人法测得的结果相关性很好；无放射性污染；操作简单，但敏感性较³H-TdR掺入法稍差。