产品简介

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca++依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，细胞通透性增加，PI能透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin V与PI搭配，联合使用，就可以将凋亡早期、晚期以及死亡细胞区分开来。

细胞凋亡检测试剂盒（Cell Apoptosis Assay Kit）以PI和FITC标记的Annexin V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可非常轻松而简便的对细胞凋亡的发生进行检测分析。随试剂盒配备有PBS结合缓冲液，使实验操作更加便利快捷。

包装

保存

2-8℃ 储存，有效期一年。

使用方法

1. 贴壁细胞，先用胰酶等细胞消化液分散使成单个细胞悬液；

2. 细胞计数后取5×105 -1×106个/ml 细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；

3. 加入1ml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮；

4. 1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；

5. 重复步骤3、4两次；

6. 将细胞重悬于200ul结合缓冲液；

7. 加入10ul Annexin V-FITC轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30分钟。

8. 加入300ul 结合缓冲液(总反应体积500 ul)以及5ul PI，在1小时内上机(流式细胞仪)检测；

9. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。

注意事项

1. 为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项；

2. 试剂在开盖前请先离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落；

3. 碘化丙啶能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，还可能致癌，请穿戴手套等防护用具；

4. 此Annexin V-FITC和碘化丙啶是光敏物质，在操作时请注意避光；

5. 操作应尽量在0-4℃下操作，勿用力吹打细胞，动作要尽量轻柔；

6. 反应结束后应尽快上机检测，因为凋亡是一个动态过程，反应1小时后荧光强度就开始衰减；

7. 在最后一次洗涤细胞时，请尽量将上清弃净，以免因PBS残留而影响实验结果；

8. PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。

9. 以下因素会影响结果：细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，这些影响因素在进行实验优化时应予特别关注。

10. 细胞悬液特别是贴壁生长的细胞在加入PI之前最好用200目以上筛网过滤以去除聚集的细胞团。