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SDN组织细胞裂解液

产品编号

包装

价格

6010001-L

30ml

86.00

6010001-L1

70ml

138.00

6010001-L2

120ml

216.00

产品简介

  WIP系列组织细胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ),是一种在非变性条件下裂解组织细胞的裂解液。本系列产品裂解细胞获得的裂解产物,可用于PAGE,蛋白印迹(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitationIP),免疫共沉淀(co-IP)和蛋白与多肽的分离纯化。组织细胞裂解液的基本成分为Tris(pH 7.520mM)150mM NaCl,主要成份为去垢剂以及多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF等蛋白酶抑制剂。不仅可以用于细胞培养物的裂解,也可直接用于大多数动物组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时,可强烈地抑制蛋白、多肽的降解,并保持原有的分子结构和蛋白间相互作用。依据含去垢剂和对组织裂解能力强弱的不同,本系列产品分为强、中、弱3种不同的类型。

  SDN组织细胞裂解液(SDN Tissue and Cell Lysis Solution)WIP系列产品中裂解能力最强的增强型试剂,基本成份为Tris(pH 7.520mM)150mM NaCl,因主要成份含去垢剂SDS,脱氧胆酸钠和NP-40而得名。SDN中也含有多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF等蛋白酶抑制剂。SDN可直接用于大多数动物组织以及细胞培养物的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时,可强烈地抑制蛋白、多肽的降解,并基本保持分子原有的结构和蛋白间相互作用。

    SDN裂解得到的组织细胞蛋白样品,可以用翰谱生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质,不能用Bradford试剂盒测定由本裂解液裂解所得到的组织细胞样品的蛋白浓度。

包装

产品编号

6010001-L

6010001-L1

6010001-L2

SDN组织细胞裂解液

30ml

70ml

120ml

PMSF100X

0.3ml

0.7ml

1.2ml

说明书

1

保存

   -20℃保存,一年有效。

使用说明

    1.培养细胞

    取出SDN裂解液,待融化后颠倒混匀数次,适量分装冻存。在使用前取出PMSF(100mM),按比例加入(使其最终浓度为1mM)混匀,立即使用。

    贴壁细胞,去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入SDN。用枪吹打数下,使WIP和细胞充分接触。通常SDN接触细胞数秒后细胞就会被裂解。

    悬浮细胞,收集培养细胞,离心去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗),用手指把细胞用力弹散,按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入SDN。如果细胞数量较大,应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加WIP。用手指轻弹管底以促进SDN和细胞充分接触,裂解完全时应无明显的细胞颗粒。

    裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

    2.组织样品

    Ep管,分别称重标记,把组织剪切成小块装入Ep管中,称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入SDN(如裂解不完全,可以适当增加SDN的用量;如需要的蛋白样品浓度较高,可以适当减少SDN的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    如果组织样品本身非常细小,如淋巴细胞,可直接加入SDN裂解,通过振荡(Vortex)以使样品裂解完全。

注意事项

    1.为获得最佳的实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。

    2PMSF应现用现加。

    3.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

    4.蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健机构咨询。

 

 

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