产品简介

　　WIP系列组织细胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation )，是一种在非变性条件下裂解组织细胞的裂解液。本系列产品裂解细胞获得的裂解产物，可用于PAGE，蛋白印迹(Western Blot)，免疫沉淀(immnolprecipitation，IP)，免疫共沉淀(co-IP)和蛋白与多肽的分离纯化。组织细胞裂解液的基本成分为Tris(pH 7.5，20mM)，150mM NaCl，主要成份为去垢剂以及多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF等蛋白酶抑制剂。不仅可以用于细胞培养物的裂解，也可直接用于大多数动物组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时，可强烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子结构和蛋白间相互作用。依据含去垢剂和对组织裂解能力强弱的不同，本系列产品分为强、中、弱3种不同的类型。

　　SDN组织细胞裂解液(SDN Tissue and Cell Lysis Solution)为WIP系列产品中裂解能力最强的增强型试剂，基本成份为Tris(pH 7.5，20mM)，150mM NaCl，因主要成份含去垢剂SDS，脱氧胆酸钠和NP-40而得名。SDN中也含有多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF等蛋白酶抑制剂。SDN可直接用于大多数动物组织以及细胞培养物的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时，可强烈地抑制蛋白、多肽的降解，并基本保持分子原有的结构和蛋白间相互作用。

    用SDN裂解得到的组织细胞蛋白样品，可以用翰谱生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质，不能用Bradford试剂盒测定由本裂解液裂解所得到的组织细胞样品的蛋白浓度。

包装

保存

   -20℃保存，一年有效。

使用说明

    1．培养细胞

    取出SDN裂解液，待融化后颠倒混匀数次，适量分装冻存。在使用前取出PMSF(100mM)，按比例加入（使其最终浓度为1mM）混匀，立即使用。

    贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入SDN。用枪吹打数下，使WIP和细胞充分接触。通常SDN接触细胞数秒后细胞就会被裂解。

    悬浮细胞，收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)，用手指把细胞用力弹散，按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入SDN。如果细胞数量较大，应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加WIP。用手指轻弹管底以促进SDN和细胞充分接触，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。

    裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

    2．组织样品

    取Ep管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入Ep管中，称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入SDN(如裂解不完全，可以适当增加SDN的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少SDN的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入SDN裂解，通过振荡（Vortex）以使样品裂解完全。

注意事项

    1．为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。

    2．PMSF应现用现加。

    3．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

    4．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健机构咨询。